热质粒和病毒准备- 2021年7月

通过各种Addgenies

各种Addgenies2021年7月27日,

每隔几个月，我们就会通过我们的热质粒的文章．这些文章提供了最近质粒沉积的简要总结，我们希望它们将使您更容易找到和使用您需要的质粒。

以下是你将在这篇文章中发现的内容:

在类器官中基于crispr的基因组编辑的新工具包

类器官是模拟器官形态和生理方面的三维培养在体外并成为理解人类生理、发育和疾病的强大模型。为了扩大他们的模型的影响，器官类使用者最近开始开发基于crispr的方法来研究这些系统中的基因功能。作为这一努力的一部分罗林斯实验室编制了一个新的工具箱，用于在类器官中进行遗传学研究。的瀑样EasyTag系统是一个简单的工作流程，用于在一个类器官模型中进行基因靶向、报告基因生成、可控基因敲除和诱导性基因失活或激活(Sun，等，2021)。

图1:来自Organoid EasyTag系统的示例示意图，显示了可诱导CRISPR抑制(CRISPRi)的工作流程。A)慢病毒载体设计。B)无泄漏转录控制策略。C)迭代转换工作流概述。从图片Sun等人，2021年．

Organoid EasyTag工作流结合了精心设计的质粒组件与荧光激活细胞分选(FACS)，允许富集成功的靶向细胞，可用于生成感兴趣的修饰的Organoid培养物。虽然作者优化了用于胎儿肺衍生器官系统的工作流程，但该方法旨在适应来自其他组织类型的器官。通过将基于crispr的方法和器官模型结合在一起，像这样的工具包为研究与形态发生、细胞命运规范和人类疾病相关的遗传机制提供了新的机会。

Sun等人。2021.https://doi.org/10.1101/2020.05.04.076067

新型荧光酶生物传感器可直接、特异、灵敏地检测植物激素独角兽内酯

通过Fabienne Furt

目前用于检测独角兽内酯(SLs)的方法是昂贵的，不定量或需要大量的优化。Claudia Vickers的实验室通过整合SL不敏感荧光团(LSSmOrange)作为内部控制和SL敏感荧光团(循环排列绿色荧光蛋白或cpGFP)设计了新型SL荧光生物传感器）到矮牵牛花SL酶受体DAD2。SLs诱导受体的构象变化的荧光强度调节cpGFP不改变内部控制的(图1)。因为这种方法依赖于荧光比率2荧光团,而不是荧光强度,它提供了一个SLs的直接和定量检测。作者还表明，基于受体的荧光生物传感器对SLs具有高灵敏度(50 nM-500nM)和高特异性在体外，他们进一步证明，当在烟草原生质体中测试时，酶生物传感器保持其催化活性。

由于SLs也被认为可以触发寄生植物的种子萌发，因此该方法也被用来建立和验证基于寄生植物的比率荧光生物传感器Striga hermonthicaSL受体HTL7。这种新型生物传感器可用于高通量筛选农用化合物，这些化合物有调节谷物作物寄生的潜力。因此，这些新型生物传感器的农业应用可能会产生重大的经济影响。

基于受体的SL荧光生物传感器的设计及作用机制。从图片切斯特菲尔德等人，2020年

切斯特菲尔德等人，ACS合成生物学2020。https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acssynbio.0c00192

CRISPR角

通过詹妮弗曾

新的CRISPR质粒总是被添加到存储库中。要找到Addgene中所有可用的CRISPR质粒，请访问我们的CRISPR质粒和资源页面．以下是过去几个月的一些亮点:

一个新的慢病毒CRISPR图书馆来自Alec Kimmelman的研究以小鼠代谢基因为靶点，每个基因约有6个gRNAs。
CRISPR-Act3.0该技术可使植物的基因同时激活。
FnCas12a与其他已鉴定的Cas12a核酸酶不同，它可以在43°C以下的温度下工作，并可用于中度嗜热菌的基因组编辑。
这些进化SpCas9变体与野生型相比，NAG PAMS活性提高，NGG PAMS活性降低。
一个新的全基因组CRISPR敲除文库来自Xiaole Shirley Liu的实验室针对所有小鼠基因，每个基因有10个gRNAs。该指南是优化，以最大限度的目标上解理和最小化脱靶效应。